用于免疫熒光染色的染料需具備以下幾個(gè)條件：

熒光染料應(yīng)有較高的量子產(chǎn)額和消光系數(shù)；

熒光染料對488nm的激發(fā)光波長有較強(qiáng)的吸收；

發(fā)射光波長與激發(fā)光波長之間應(yīng)有較大的波長差；

容易與被標(biāo)記的單克隆抗體結(jié)合而不影響抗體自身的特異性。

1.異硫氰酸熒光素（FITC）：可產(chǎn)生亮綠色熒光。FITC是免疫熒光標(biāo)記最/常用的熒光探針。

2.德州紅：與生物/素偶聯(lián)的抗體有很強(qiáng)的親和力，產(chǎn)生紅色熒光。

3.藻膽蛋白類：主要包括藻紅蛋白（PE）、藻青蛋白（PC）、別藻青蛋白（APC）三類。多發(fā)生橙色至紅色熒光。

4.能量傳遞復(fù)合染料

免疫熒光用什么封閉比較好？

可以使用無蛋白封閉液 PW040 PW041 PW042，

血清封閉：組織切片上有剩余的位點(diǎn)可以與一抗非特異性結(jié)合，造成后續(xù)結(jié)果的假陽性；封閉血清一般是和二抗同一來源的，血清中動(dòng)物自身的抗體，預(yù)先能和組織中有交叉反應(yīng)的位點(diǎn)發(fā)生結(jié)合；也可以用小牛血清、BSA、羊血清等，但不能與一抗來源一致。